टीबीई बफर को 3 आसान चरणों में कैसे करें

टीबीई बफर ट्रिस आधार, बोरिक एसिड और ईडीटीए (या ट्राइस-बोराटे-ईडीटीए पूरी तरह से) से बने एक बफर समाधान है। यह बफर अक्सर डीपीए प्रवर्धन, डीएनए शुद्धि प्रोटोकॉल या डीएनए क्लोनिंग प्रयोगों से उत्पन्न डीएनए उत्पादों के विश्लेषण में agarose जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए प्रयोग किया जाता है।

टीबीई बफर छोटे डीएनए टुकड़े (एमडब्लू <1000) के अलग होने के लिए विशेष रूप से उपयोगी है, जैसे प्रतिबंध एंजाइम के छोटे उत्पाद

टीबीई में अधिक बफरिंग क्षमता है और टीएई बफर की तुलना में तेज प्रस्ताव देगा। टीएई बफर ट्रिस आधार, एसिटिक एसिड और ईडीटीए (ट्राइस-एसीटेट-ईडीटीए) से बना एक समाधान है।

टीबीई टीएई की तुलना में आम तौर पर अधिक महंगा है और डीएनए लेगेज को रोकता है, जिसके बाद डीएनए शुद्धि और बाध्यकारी कदमों का इरादा है। अनुसरण करने वाले तीन सरल चरणों के साथ, टीबीई बफर बनाने के बारे में जानें। यह बफर बनाने के लिए लगभग 30 मिनट से अधिक नहीं लेना चाहिए। यहाँ कैसे है:

ईडीटीए के स्टॉक सोल्यूशन तैयार करें

एक ईडीटीए (एथिलीनैनेयमैन टेट्राएसेटिक एसिड) समाधान समय से पहले तैयार किया जाना चाहिए। एडीटीए पूरी तरह से समाधान में नहीं जाएंगे, जब तक पीएच को लगभग 8 में समायोजित नहीं किया जाता है। 0. 500 एमिलिलेटर स्टॉक समाधान के लिए 0. 5 एम EDTA का वजन 9 3। EDTA disodium salt (FW = 372. 2) के 05 ग्राम। फिर इसे 400 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में भंग कर दें और पीओएच को नाओएच के साथ समायोजित करें। उसके बाद, 500 मिलीलीटर के अंतिम मात्रा के समाधान के ऊपर

टीबीई के स्टॉक समाधान तैयार करें

54 जी ट्रिस बेस (एफडब्ल्यू = 121. 14) और 27. 5 ग्रा। बोरिक एसिड (एफडब्ल्यू) के वजन से टीबीई के एक केंद्रित (5x) स्टॉक समाधान करें। = 61. 83) और लगभग 900 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में दोनों को भंग कर दिया। फिर 0. 0 एम 0 डीडीटीए (पीएच 8. 0) के 20 मिलीलीटर जोड़ें और 1 लीटर की अंतिम मात्रा के समाधान को समायोजित करें।

यह समाधान कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है लेकिन पुराने समाधानों में द्रुतगति का निर्माण होगा। कांच की बोतलों में बफर को स्टोर करें और अगर कोई वेग उत्पन्न होता है तो उसे छोड़ दें।

टीबीई का कार्य समाधान तैयार करें

agarose जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए, एक टीबीई बफर का इस्तेमाल 0. 5x (एकाग्र स्टॉक के 1: 10 कमजोर पड़ने) की एकाग्रता में किया जा सकता है। विखंडित पानी में 10x से स्टॉक समाधान पतला अंतिम संलयन सांद्रता 45 मिमी त्रि-बोरेट और 1 मिमी ईडीटीए हैं। अब बर्गर एक agarose जेल चलाने में उपयोग के लिए तैयार है।

आपको क्या चाहिए

टीबीई बफर बनाने के लिए, आपको सिर्फ चार पदार्थों की ज़रूरत होगी इस सूची में शेष आइटम हैं उपकरण चार पदार्थों की आवश्यकता होती है EDTA disodium नमक, ट्राइस बेस, बोरिक एसिड और विआयनीकृत पानी।

उपकरण के लिए, आपको एक पीएच मीटर और अंशांकन मानकों की आवश्यकता होगी, जैसा उपयुक्त है इसके अलावा, आपको 600 मिलीलीटर और 1500 मिलीलीटर बीकर या फ्लास्क की आवश्यकता होगी। अपने उपकरणों की जरूरतों को पूरा करने के लिए स्नातक की उपाधि प्राप्त की गई सिलेंडर्स और सलाखों को हल करें और प्लेटों को हल करें।

उस प्रयोगशाला में इन्वेंट्री की जांच करें जो आप शुरू करने से पहले सुनिश्चित करें कि आपके पास जो भी चीजें हैं उसके लिए आप उपयोग करेंगे। किसी समाधान की तैयारी के बीच में बंद होने के अलावा कुछ भी बुरा नहीं है क्योंकि आपने उचित सामग्री से भाग लिया है

यदि आपकी प्रयोगशाला स्कूल या आपकी साइट पर है, तो उचित कर्मियों से जांच लें कि उन्हें स्टॉक में सभी चीजें हैं। ऐसा करने से आप समय और ऊर्जा को अंत में बचा सकते हैं।