प्रोटीन अलगाव में विशिष्ट गतिविधि का महत्व

विशिष्ट गतिविधि एक शब्द है जिसे सब्सट्रेट के साथ एंजाइम की प्रतिक्रिया की दर को मापने के लिए उपयोग किया जाता है।

विशिष्ट एंजाइम गतिविधि (शॉर्ट के लिए विशिष्ट गतिविधि) एंजाइम शुद्धता का एक उपाय है और इसे इकाइयों / एमजी के रूप में उद्धृत किया गया है प्रोटीन की मात्रा (एमजी) आम तौर पर कम है, क्योंकि एन्जाइम की तैयारी शुद्ध हो जाती है, लेकिन मूल्य की प्रतिक्रिया अधिक होती है, लेकिन प्रतिक्रिया की दर एक ही (या कम हस्तक्षेप या अवरोधकों को हटाने के कारण बढ़ सकती है) रहती है।

विशिष्ट गतिविधि: एन्जाइम कैनेटीक्स मापना

थोड़ा सा पृष्ठभूमि के रूप में, एंजाइम प्रोटीन होते हैं जो उत्पन्न होने वाली प्रतिक्रिया के लिए सक्रियण ऊर्जा की मात्रा को कम करने में उत्प्रेरक के रूप में कार्य करते हैं। सक्रियण ऊर्जा ऊर्जा है जो प्रतिक्रियाओं "शुरू" के लिए आवश्यक है क्योंकि कई प्रतिक्रियाओं बहुत जल्दी (या सभी में घटित) नहीं होते हैं यदि वे thermodynamically संभव हैं।

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एंजाइम एक विशेष साइट (सक्रिय साइट के रूप में जाना जाता है) में विशिष्ट प्रतिक्रियाओं का उत्प्रेरित करती है जहां रिएक्टेंट उत्पादों को बाँधते हैं और उत्पादों के निर्माण पर प्रतिक्रिया देते हैं। सबस्ट्रेट्स में सक्रिय साइटें होती हैं जो केवल उनके लिए विशिष्ट होती हैं ताकि किसी अन्य पदार्थ को उसी साइट पर बाँध या प्रतिक्रिया न हो। ताला और चाबी की तरह, प्रत्येक एंजाइम केवल एक विशिष्ट प्रतिक्रिया (कुछ अपवादों के साथ) उत्प्रेरित करेगा।

शुद्धि के प्रतिशत को इंगित करने के लिए प्रोटीन अलगाव के तरीकों में विशिष्ट गतिविधि का उपयोग किया जाता है। इन यूनिट को जानना जरूरी है कि एंजाइम क्रय करने के लिए आप कितनी शुद्ध एंजाइम मिल रहे हैं।

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जब एंजाइम कैनेटीक्स (सब्सट्रेट - या सतह के साथ एंजाइम की प्रतिक्रिया की दर) मापते हैं, तो विशिष्ट गतिविधि को सब्सट्रेट की मात्रा एंजाइम धर्मान्तरित (प्रतिक्रियाओं उत्प्रेरित) के रूप में परिभाषित किया जाता है, प्रति एंजाइम की तैयारी में मिलीग्राम प्रोटीन, समय की प्रति यूनिट।

विशिष्ट गतिविधि का एक उदाहरण होगा:

पृथक एंजाइम की विशिष्ट गतिविधि शुद्धिकरण के बाद 150 umoles / min / mg प्रोटीन और 800 umoles / min / mg से पहले मापा गया था।

• विशिष्ट गतिविधि एंजाइम शुद्धता का एक महत्वपूर्ण उपाय है एक शुद्ध एंजाइम के विभिन्न बैचों में एक ही मूल्य होना चाहिए और यहां तक ​​कि एंजाइम समाधान को भी कम करना चाहिए, कई बार समान विशिष्ट क्रियाकलाप के मूल्य होंगे, भले ही एंजाइम की विविधता वाले मूल्यों को अलग-अलग हो। ऐसा इसलिए है क्योंकि विशिष्ट गतिविधि की गणना में, अंश (इकाइयों / एमएल) और विभाजक (मिलीग्राम / एमएल) समान रूप से प्रभावित होते हैं।

विशिष्ट गतिविधि गतिविधि से बहुत भिन्न है, लेकिन विशिष्ट गतिविधि की गणना अभी भी गतिविधि मूल्य पर निर्भर है। इसका मतलब यह है कि निर्दिष्ट विशिष्ट गतिविधि मूल्य भी एंजाइम इकाई परिभाषा पर निर्भर होगा।

एंजाइमों के बैचों, जो अपेक्षित विशिष्ट गतिविधि मूल्य से कम है, में एंजाइम अणु शामिल हो सकते हैं जो अशुद्धियों के साथ परिवर्तित या मिश्रित हो गए हैं।

एंजाइम गतिविधि को प्रभावित करने वाले कारक

यह संभव है कि अलग-अलग प्रयोगशालाओं में मापा जाने वाला एक एंजाइम अलग-अलग मापा गतिविधि मूल्य हो सकता है (अर्थात, मापा गतिविधि में वास्तविक मतभेद, अलग इकाई परिभाषाओं के उपयोग के कारण स्पष्ट मतभेद नहीं)।

जिस तरह से एक परख किया जाता है (एंजाइम की शुद्धता निर्धारित करने के लिए परीक्षण की विधि) रिपोर्ट गतिविधि मूल्यों को प्रभावित करेगा। उदाहरण के लिए, एंजाइम आम तौर पर अधिक से अधिक 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान के बीच 20 डिग्री सेल्सियस की तुलना में अधिक सक्रिय हैं, इसलिए यदि एक परख 21 डिग्री सेल्सियस पर किया जाता है, तो मान 32 डिग्री सेल्सियस (आमतौर पर , assays 20-37 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान पर किया जाता है)

इस प्रकार, एंजाइम इकाई की परिभाषा बेहतर रूप से व्यक्त की जाएगी: 1 इकाई (यू) मानक परिस्थितियों के तहत सब्सट्रेट प्रति मिनट 1 एनएमएल की प्रतिक्रिया का उत्प्रेरित एंजाइम की मात्रा है।