पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन

पीसीआर नियंत्रित परिस्थितियों में डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम का उपयोग करके कई प्रतियां पैदा करके, डीएनए के सेगमेंट को बढ़ाकर पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन, आणविक जीव विज्ञान तकनीक के लिए खड़ा है। एक डीएनए खंड या जीन की एक प्रति के रूप में जितनी कम हो, लाखों प्रतियों में क्लोन किया जा सकता है, जो रंगों और अन्य विज़ुअलाइज़ेशन तकनीकों का पता लगाने की अनुमति देता है।

1 9 83 में विकसित, पीसीआर की प्रक्रिया ने डीएनए अनुक्रमण करने और व्यक्तिगत जीन में न्यूक्लियोटाइड्स के आदेश की पहचान करना संभव बना दिया है।

विधि थर्मल साइकिल चालन या डीएनए पिघलने और प्रतिकृति के लिए प्रतिक्रिया के दोहराए गए हीटिंग और कूलिंग का उपयोग करता है। जैसा कि पीसीआर जारी है, "नया" डीएनए को प्रतिकृति के लिए एक टेम्पलेट के रूप में प्रयोग किया जाता है और एक चेन रिएक्शन, डीएनए टेम्प्लेट को तेजी से बढ़ाना है।

पीसीआर तकनीक जैव प्रौद्योगिकी के कई क्षेत्रों में प्रोटीन इंजीनियरिंग, क्लोनिंग, फोरेंसिक (डीएनए फिंगरप्रिंटिंग), पितृत्व परीक्षण, वंशानुगत और / या संक्रामक रोगों के निदान और पर्यावरणीय नमूने के विश्लेषण के लिए शामिल हैं।

फोरेंसिक में, विशेष रूप से, पीसीआर विशेष रूप से उपयोगी है क्योंकि यह डीएनए साक्ष्य की सबसे छोटी राशि भी बढ़ाता है। पीसीआर का उपयोग डीएनए के विश्लेषण के लिए भी किया जा सकता है जो कि हजारों साल पुराना है, और इन तकनीकों का इस्तेमाल दुनिया भर के 800,000 साल पुराना मैम से लेकर ममियों तक करने के लिए किया गया है।

पीसीआर प्रक्रिया इस प्रकार है:

• आरंभ: यह चरण केवल डीएनए पोलिमरेसेस के लिए जरूरी है जिसे गर्म-शुरू पीसीआर की आवश्यकता होती है। प्रतिक्रिया 94 और 96 डिग्री सेल्सियस के बीच गरम होती है और 1-9 मिनट के लिए आयोजित होती है।

• डाण्यता: यदि प्रक्रिया को आरम्भिकरण की आवश्यकता नहीं है, तो विकृति पहला कदम है। प्रतिक्रिया 20-30 सेकंड के लिए 94-98 डिग्री सेल्सियस तक गर्म होती है। डीएनए टेम्प्लेट के हाइड्रोजन बांड बाधित होते हैं और एकल-फंसे डीएनए अणुओं को बनाया जाता है।
• एनलिंग: प्रतिक्रिया तापमान 50 से 65 डिग्री सेल्सियस तक कम होता है और 20-40 सेकंड तक आयोजित होता है। प्राइमरों एकल-फंसे डीएनए टेम्प्लेट में एंनी। इस चरण के दौरान तापमान अत्यंत महत्वपूर्ण है। यदि यह बहुत गर्म है, तो प्राइमर बाइंड नहीं हो सकता है। यदि यह बहुत ठंडा है, तो प्राइमर अपूर्ण रूप से बाध्य हो सकता है एक अच्छा बंधन बनता है जब प्राइमर अनुक्रम टेम्प्लेट अनुक्रम से निकटता से मेल खाता है। विस्तार / बढ़ाव: इस चरण के दौरान तापमान में बहुलक प्रकार के प्रकार के आधार पर भिन्न होता है। डीएनए पोलीमरेज़ एक पूरी तरह से नई डीएनए किनारा synthesizes।
• अंतिम वृद्धि: अंतिम चरण पीसीआर चक्र के बाद यह चरण 5-15 मिनट के लिए 70-74 डिग्री सेल्सियस पर किया जाता है।
• अंतिम पकड़: यह कदम वैकल्पिक है। तापमान 4-15 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है और प्रतिक्रिया को कम कर देता है।
• प्रक्रिया को तीन चरणों में बांटा गया है: घातीय प्रवर्धन:

प्रत्येक चक्र के दौरान उत्पाद (डीएनए का विशिष्ट टुकड़ा दोहराया जा रहा है) दोगुना हो गया है।

• स्तर बंद करना: डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि को खो देता है और अभिकर्मकों की खपत करता है, तो प्रतिक्रिया धीमा होती है। पठार:
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